Ral B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425679

Panoramica

Ralb codifica la piccola GTPasi Ral B, un interruttore molecolare di tipo Ras che alterna ciclicamente gli stati legati a GDP e a GTP per regolare il traffico di membrana e il rimodellamento del citoscheletro. Ral B trasduce segnali attraverso effettori quali il complesso dell’esocisto e RalBP1 per controllare l’ancoraggio delle vescicole, l’endocitosi, la polarità cellulare e la citochinesi, e può interfacciarsi con la segnalazione da stress e dell’immunità innata tramite vie associate all’attivazione di TBK1. Attraverso questi processi, Ral B influenza programmi di proliferazione, migrazione e sopravvivenza cellulare, spesso studiati nel contesto dell’output della rete di Ras oncogenico e dell’invasione delle cellule tumorali. Nei modelli murini, la perturbazione di Ralb supporta l’indagine meccanicistica di nodi di segnalazione delle piccole GTPasi implicati nella biologia del cancro e in fenotipi associati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ralb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ralb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ralb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ral B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ralb per lo studio della segnalazione di Ral B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ralb critici per la funzione di Ral B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ralb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ral B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ral B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ralb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ral B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ral B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ralb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ralb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.