Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral B (m): sc-425679

Présentation

Ralb code la petite GTPase Ral B, un interrupteur moléculaire de type Ras qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de réguler le trafic membranaire et le remodelage du cytosquelette. Ral B transmet des signaux via des effecteurs tels que le complexe exocyste et RalBP1 pour contrôler l’amarrage des vésicules, l’endocytose, la polarité cellulaire et la cytocinèse, et peut s’interfacer avec les voies de signalisation du stress et de l’immunité innée via des mécanismes associés à l’activation de TBK1. Par ces processus, Ral B influence des programmes de prolifération, de migration et de survie cellulaires, fréquemment étudiés dans le contexte des sorties de signalisation du réseau Ras oncogénique et de l’invasion des cellules tumorales. Dans des modèles murins, la perturbation de Ralb permet d’explorer les mécanismes de nœuds de signalisation des petites GTPases impliqués dans la biologie du cancer et dans des phénotypes associés à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ralb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ralb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ralb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ral B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ralb pour l'étude de la signalisation de Ral B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ralb essentiels à la fonction de Ral B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ralb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ral B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ral B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ralb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ral B plasmide HDR (m) et le Ral B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ralb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ralb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.