Rad54B Plasmide Double Nickase (h): sc-403794-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rad54B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rad54B Double Nickase Plasmid (h) e il Rad54B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAD54B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rad54B Antibody (19-K2): sc-101234
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rad54B Plasmide Double Nickase (h) | sc-403794-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rad54B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403794-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAD54B codifica Rad54B, un’ATPasi dipendente dal DNA della famiglia SWI2/SNF2 che agisce nella ricombinazione omologa cooperando con RAD51 per rimodellare il DNA e promuovere l’invasione del filamento durante la riparazione delle rotture a doppio filamento. Rad54B contribuisce alla stabilità del genoma grazie a ruoli nella segnalazione della risposta al danno al DNA, nella riparazione associata alla replicazione e nel recupero dallo stress genotossico, collegandosi alle vie centrali della ricombinazione omologa e ai checkpoint mediati dalla ricombinazione. Un’alterazione dell’attività di RAD54B può aumentare l’instabilità cromosomica e il carico mutazionale, aspetti spesso studiati nel contesto della biologia tumorale e di condizioni con difetti di riparazione del DNA. Di conseguenza, RAD54B è ampiamente investigato per il suo impatto sull’efficienza di ricombinazione, sulla sensibilità ad agenti che danneggiano il DNA e sui meccanismi che garantiscono il corretto mantenimento dei cromosomi.
Rad54B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAD54B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAD54B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAD54B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAD54B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.