Rab11-FIP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407521-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab11-FIP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab11-FIP1 Double Nickase Plasmid (h) e il Rab11-FIP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAB11FIP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab11-FIP1 Antibody (3A12H9D2): sc-517228
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab11-FIP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407521-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab11-FIP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407521-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB11FIP1 codifica Rab11-FIP1, un effettore della famiglia Rab11 che coordina il traffico degli endosomi di riciclo dipendente da Rab11 e il riciclo di membrana verso la membrana plasmatica. Attraverso interazioni con piccole GTPasi e proteine motrici/adattatrici, Rab11-FIP1 contribuisce a regolare il riciclo dei recettori, il trasporto polarizzato, la citochinesi e il mantenimento dell’architettura delle cellule epiteliali. Questi processi influenzano gli output di segnalazione e la motilità cellulare controllando la localizzazione e il turnover delle proteine di membrana, inclusi recettori e molecole di adesione. Un riciclo endosomiale deregolato e programmi di traffico associati a Rab11-FIP1 sono stati collegati a comportamenti proliferativi e migratori alterati nella biologia dei tumori e a difetti più ampi nelle vie di trasporto vescicolare rilevanti per la neurobiologia e la regolazione metabolica.
Rab11-FIP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAB11FIP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAB11FIP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAB11FIP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAB11FIP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.