PYGL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430989

Panoramica

Il gene murino **Pygl** codifica la glicogeno fosforilasi epatica (PYGL), un enzima limitante della velocità che mobilizza il glicogeno catalizzando la scissione fosforolitica per generare glucosio-1-fosfato, destinato alla glicolisi a valle e al mantenimento dell’omeostasi del glucosio. L’attività di PYGL coordina la glicogenolisi epatica con input ormonali e segnali di sensing dei nutrienti, collegando la disponibilità di carboidrati al flusso metabolico attraverso le principali vie del carbonio centrale. Alterazioni della funzione di PYGL modificano l’accumulo e l’utilizzo del glicogeno e sono rilevanti per gli errori congeniti del metabolismo del glicogeno, rendendolo un bersaglio utile per studiare l’adattamento metabolico e il bilancio energetico negli epatociti e in modelli animali. Pygl è quindi ampiamente informativo per la ricerca sulla programmazione metabolica epatica, le risposte al digiuno e la regolazione a livello di sistema del metabolismo del glucosio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PYGL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pygl in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pygl insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pygl a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PYGL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pygl per lo studio della segnalazione di PYGL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pygl critici per la funzione di PYGL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pygl per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PYGL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PYGL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pygl. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PYGL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PYGL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pygl per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pygl definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.