PTPRH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406293

Panoramica

PTPRH (protein tyrosine phosphatase receptor type H) è una fosfatasi transmembrana di tipo recettoriale che modula la segnalazione basata sulla fosforilazione della tirosina alla superficie cellulare, plasmando le vie a valle che controllano proliferazione, adesione e motilità cellulare. Bilanciando l’attività delle tirosin-chinasi recettoriali e i relativi output di segnalazione MAPK e PI3K/AKT, PTPRH può influenzare la risposta ai fattori di crescita e il comportamento delle cellule epiteliali. Un’espressione o un’attività deregolata di PTPRH è stata associata a stati di segnalazione oncogenica alterati e a fenotipi correlati al tumore in diversi contesti oncologici, rendendola rilevante per analizzare reti regolatorie dipendenti dalla fosforilazione. In quanto fosfatasi associata alla membrana, è anche utile per studiare l’integrazione dei segnali tra stimoli extracellulari e circuiti intracellulari chinasi/fosfatasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPRH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTPRH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTPRH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTPRH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTPRH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTPRH per lo studio della segnalazione di PTPRH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PTPRH critici per la funzione di PTPRH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTPRH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PTPRH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PTPRH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTPRH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PTPRH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PTPRH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTPRH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTPRH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.