PSR Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430761-LAC

Jmjd6 codifica la proteina murina PSR, un enzima contenente un dominio Jumonji C (JmjC) implicato nella regolazione epigenetica e post-trascrizionale attraverso attività di demetilazione e idrossilazione su substrati proteici e di RNA. PSR partecipa al controllo trascrizionale, allo splicing alternativo e a processi associati alla cromatina che influenzano decisioni sullo stato cellulare quali proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. Tra i collegamenti funzionali riportati figurano la modulazione della segnalazione legata all’ipossia, dei macchinari di processamento dell’RNA e di programmi più ampi di espressione genica, spesso alterati nella biologia del cancro e nei meccanismi delle malattie infiammatorie. Di conseguenza, Jmjd6/PSR è studiato di routine per i suoi ruoli nelle reti di regolazione genica e per i contributi dipendenti dal contesto a fenotipi patologici nei sistemi dei mammiferi.

Le particelle di attivazione lentivirale PSR (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Jmjd6 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PSR (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Jmjd6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PSR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Jmjd6 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.