PSK2 Plasmide Double Nickase (h2): sc-418247-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PSK2 Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PSK2 Double Nickase Plasmid (h2) e il PSK2 Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TAOK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PSK2 Antibody (22): sc-136094
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PSK2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418247-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La TAOK1 umana (TAO kinase 1), nota anche come PSK2, codifica una chinasi serina/treonina che agisce a monte della segnalazione MAPK, in particolare delle cascate p38 e JNK attivate dallo stress, coordinando la dinamica del citoscheletro, l’organizzazione del centrosoma e i processi dipendenti dai microtubuli importanti per la mitosi e lo sviluppo neuronale. L’attività di TAOK1 integra segnali provenienti dallo stress cellulare e dalle vie della polarità, influenzando reti di fosforilazione che regolano apoptosi, migrazione e crescita dei neuriti. Studi genetici e funzionali hanno implicato la deregolazione di TAOK1 in fenotipi neuroevolutivi e nel rimodellamento della segnalazione associata al cancro, supportandone la rilevanza in modelli di controllo MAPK alterato e di comportamento cellulare guidato dal citoscheletro. L’editing genetico di TAOK1 consente di interrogare i meccanismi del crosstalk tra vie dipendenti dalla chinasi, di mappare i substrati di fosforilazione e di generare sistemi cellulari umani isogenici per studiare le relazioni genotipo–fenotipo in contesti rilevanti per la malattia.
PSK2 Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TAOK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TAOK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TAOK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TAOK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.