PSK2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432149

Panoramica

Il gene Taok1 del topo codifica la chinasi serina/treonina PSK2, una MAP3K della famiglia STE20 che collega segnali provenienti dal citoscheletro a vie di segnalazione attivate dallo stress. PSK2 partecipa alla regolazione delle cascate MAPK, incluse le vie JNK e p38, e contribuisce allo sviluppo neuronale, alla crescita degli assoni e all’organizzazione sinaptica attraverso effetti sulla dinamica dei microtubuli e dell’actina. L’attività di Taok1 influenza programmi legati al ciclo cellulare e all’apoptosi, collegando la segnalazione chinasica all’omeostasi cellulare. La deregolazione delle reti associate a TAOK1 è stata implicata in fenotipi dello sviluppo neurologico e in altri contesti in cui l’alterata segnalazione MAPK e il rimodellamento del citoscheletro rappresentano meccanismi patogenetici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PSK2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Taok1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Taok1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Taok1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PSK2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Taok1 per lo studio della segnalazione di PSK2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Taok1 critici per la funzione di PSK2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Taok1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PSK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PSK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Taok1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PSK2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PSK2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Taok1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Taok1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.