PSF Plasmide Double Nickase (h): sc-402024-NIC

SFPQ codifica per il fattore di splicing ricco di prolina e glutammina PSF (Proline- and glutamine-rich Splicing Factor), un fattore nucleare multifunzionale legante RNA e DNA che accoppia la trascrizione con lo splicing del pre‑mRNA, la maturazione dell’estremità 3′ e la ritenzione nucleare dell’RNA. PSF partecipa all’assemblaggio e alla regolazione dei paraspeckle tramite interazioni con il lncRNA NEAT1 e con proteine correlate della famiglia DBHS, influenzando programmi di espressione genica durante le risposte allo stress. Oltre al metabolismo dell’RNA, PSF contribuisce al mantenimento del genoma modulando la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e processi associati alla replicazione attraverso interazioni proteina–proteina nei siti di danno. La disregolazione o l’alterata localizzazione di SFPQ è stata collegata a splicing aberrante e a un controllo trascrizionale anomalo osservati nel cancro e nelle malattie neurodegenerative, rendendolo un nodo utile per studiare in cellule umane i meccanismi di malattia dipendenti dal processamento dell’RNA.

PSF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SFPQ nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SFPQ. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SFPQ. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SFPQ interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.