Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PSAP Plasmide Double Nickase (h): sc-405857-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PSAP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PSAP Double Nickase Plasmid (h) e il PSAP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NPEPPS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PSAP Antibody (E-5): sc-390184
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PSAP Plasmide Double Nickase (h) | sc-405857-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PSAP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405857-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **NPEPPS** codifica l’amminopeptidasi sensibile alla puromicina (PSAP/NPEPPS), una metallopeptidasi citosolica che rifinisce i peptidi generati dalla degradazione proteasomiale e contribuisce al riciclo degli amminoacidi e al turnover peptidico. L’attività di PSAP interseca le reti di controllo qualità delle proteine, inclusi il flusso del sistema ubiquitina–proteasoma e la processazione dei peptidi, che può influenzare la presentazione dell’antigene e la segnalazione della risposta allo stress. Regolando gli intermedi di degradazione e l’omeostasi peptidica, NPEPPS viene studiato in contesti di squilibrio della proteostasi, vulnerabilità neuronale e rimodellamento cellulare legato all’infiammazione. Un’attività amminopeptidasica deregolata è stata associata in letteratura a vie rilevanti per la neurodegenerazione e a un’alterata gestione di proteine inclini all’aggregazione, rendendo NPEPPS un bersaglio utile per studi meccanicistici sul metabolismo intracellulare dei peptidi.
PSAP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NPEPPS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NPEPPS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NPEPPS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NPEPPS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.