Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PRX III Plasmide Double Nickase (h): sc-401730-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PRX III Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PRX III Double Nickase Plasmid (h) e il PRX III Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRDX3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PRX III Antibody (1): sc-130336
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PRX III Plasmide Double Nickase (h) | sc-401730-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRX III Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401730-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDX3 codifica la perossiredossina III (PRX III), una perossidasi mitocondriale dipendente dalla tioredossina che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi organici, contribuendo a mantenere l’omeostasi redox. Controllando i livelli di ROS mitocondriali, PRX III influenza l’efficienza della fosforilazione ossidativa, la permeabilità mitocondriale e vie di segnalazione sensibili allo stato redox, incluse l’apoptosi e le reti di risposta allo stress. L’attività di PRDX3 è collegata all’adattamento cellulare all’ipossia e alla riprogrammazione metabolica, e un’espressione alterata è stata associata a fenotipi da stress ossidativo osservati in diversi tumori e in contesti neurodegenerativi e infiammatori. In quanto nodo antiossidante mitocondriale, PRX III è spesso studiata per il suo impatto sulla stabilità del genoma, sulla proteostasi e sulla modulazione, guidata dai ROS, dell’attività di chinasi e fattori di trascrizione.
PRX III Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRDX3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRDX3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRDX3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRDX3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.