PLEKHG4B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407381

Panoramica

PLEKHG4B codifica una proteina simile a un fattore di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) per Rho, contenente domini di omologia con pleckstrina e domini correlati a RhoGEF, implicati nell’accoppiamento tra la segnalazione dei fosfoinositidi e la regolazione delle piccole GTPasi. Attraverso la modulazione dell’attività delle GTPasi della famiglia Rho, PLEKHG4B è collegato al controllo della dinamica del citoscheletro di actina, del traffico di membrana e dei programmi di morfologia cellulare che influenzano adesione e motilità. L’espressione e le associazioni di rete collocano PLEKHG4B in contesti di segnalazione più ampi che intersecano vie rilevanti per il sistema nervoso e per l’immunità, in cui il rimodellamento del citoscheletro rappresenta un fattore limitante. La disregolazione della segnalazione delle GTPasi Rho e dei processi dipendenti dal citoscheletro è ricorrentemente associata a fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, nonché a comportamento invasivo in modelli di cancro, motivando l’analisi funzionale di PLEKHG4B in studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PLEKHG4B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PLEKHG4B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PLEKHG4B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PLEKHG4B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PLEKHG4B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PLEKHG4B per lo studio della segnalazione di PLEKHG4B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PLEKHG4B critici per la funzione di PLEKHG4B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PLEKHG4B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PLEKHG4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PLEKHG4B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PLEKHG4B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PLEKHG4B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PLEKHG4B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PLEKHG4B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PLEKHG4B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.