PLC γ1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400472-LAC

PLCG1 codifica la fosfolipasi C gamma 1 (PLCγ1), un enzima di segnalazione prossimale al recettore attivato a valle delle tirosin-chinasi recettoriali e di alcuni recettori immunitari selezionati tramite interazioni mediate da SH2/SH3 e fosforilazione. PLCγ1 idrolizza il PIP2 generando IP3 e DAG, avviando la mobilizzazione intracellulare di Ca2+ e l’attivazione della proteina chinasi C, che coordinano il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione e programmi trascrizionali. Questo nodo di segnalazione interagisce con le vie MAPK/ERK e PI3K-dipendenti e contribuisce a una regolazione dipendente dal contesto di proliferazione e sopravvivenza. Una segnalazione PLCG1 deregolata e mutazioni sono state riportate in molteplici contesti patologici, inclusi tumori e disturbi immuno-correlati, rendendolo un bersaglio prezioso per studi meccanicistici della trasduzione del segnale guidata dai recettori.

Le particelle di attivazione lentivirale PLC γ1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PLCG1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PLC γ1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PLCG1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PLC γ1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PLCG1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.