Plasmide CRISPR d'Activation (h) PLC γ1: sc-400472-ACT

PLCG1 code la phospholipase C gamma 1 (PLCγ1), une enzyme de signalisation proche des récepteurs, activée en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase et des récepteurs immunitaires. Une fois activée, PLCγ1 hydrolyse le PIP2 pour générer l’IP3 et le DAG, déclenchant la mobilisation intracellulaire de Ca2+ et l’activation de la PKC, qui coordonnent des programmes transcriptionnels, le remodelage du cytosquelette et la migration cellulaire. Ce nœud de signalisation intègre des entrées provenant de voies telles que EGFR/PDGFR/FGFR et la signalisation du récepteur des lymphocytes T, modulant les réponses de prolifération et de différenciation. Une activité dérégulée de PLCG1 et un remaniement des voies ont été associés à une signalisation aberrante des facteurs de croissance et à des pathologies liées à l’immunité, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la transduction du signal dépendante des phosphoinositides.

PLC γ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLCG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PLC γ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLCG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLCG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PLC γ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLCG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PLC γ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PLC γ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLCG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.