PIAS 3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401406-ACT

PIAS3 (inibitore proteico di STAT3 attivato) è una ligasi E3 della SUMO che modula le risposte trascrizionali promuovendo la SUMOilazione delle proteine nucleari e inibendo direttamente l’attività di legame al DNA di STAT3. Attraverso la regolazione della segnalazione JAK/STAT e un più ampio controllo SUMO-dipendente dell’attività dei fattori di trascrizione, PIAS3 influenza gli output della segnalazione delle citochine, la progressione del ciclo cellulare e i programmi genici responsivi allo stress. PIAS3 è stato associato a vie che governano la regolazione immunitaria e la segnalazione oncogenica, in cui si osservano frequentemente alterazioni dell’attività di STAT3 e delle dinamiche di SUMOilazione. Lo studio della funzione di PIAS3 aiuta a chiarire come le modifiche post-traduzionali e la repressione trascrizionale plasmino gli stati di espressione genica in contesti associati all’infiammazione e alla proliferazione.

PIAS 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PIAS 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione , dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PIAS 3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PIAS 3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PIAS 3 nelle cellule tumorali con espressione di silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.