Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PERK Plasmide Double Nickase (m): sc-420142-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PERK Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PERK Double Nickase Plasmid (m) e il PERK Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Eif2ak3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PERK Antibody (B-5): sc-377400
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PERK Plasmide Double Nickase (m) | sc-420142-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PERK Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420142-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Eif2ak3** codifica **PERK**, una chinasi sensore dello stress del reticolo endoplasmatico (RE) che avvia la risposta alle proteine mal ripiegate fosforilando **eIF2α**, riducendo così la traduzione globale e al contempo promuovendo programmi trascrizionali adattativi, come la segnalazione dipendente da **ATF4**. PERK integra la proteostasi con il controllo redox, l’autofagia e le decisioni apoptotiche durante uno stress prolungato, influenzando la funzione delle cellule secernenti e le risposte infiammatorie. Una segnalazione di PERK disregolata è implicata in condizioni caratterizzate da stress cronico del RE, tra cui disfunzioni metaboliche, neurodegenerazione e adattamento delle cellule tumorali allo stress, rendendo **Eif2ak3** un nodo chiave per studi meccanicistici delle vie di risposta allo stress.
PERK Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Eif2ak3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Eif2ak3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Eif2ak3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Eif2ak3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.