Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PDK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-416916-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDK2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PDK2 Double Nickase Plasmid (h) e il PDK2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PDK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PDK2 Antibody (S-15): sc-100534
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDK2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-416916-NIC | 20 µg | $410.00 |
La piruvato deidrogenasi chinasi 2 (PDK2) è una chinasi mitocondriale serina/treonina che fosforila e inibisce il complesso della piruvato deidrogenasi, limitando così la conversione del piruvato in acetil-CoA e deviando il flusso di carbonio lontano dal ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). Regolando l’equilibrio piruvato–lattato e il metabolismo ossidativo, PDK2 integra la disponibilità di nutrienti con la respirazione mitocondriale e l’omeostasi di lipidi e glucosio. L’attività di PDK2 è inserita nelle vie di segnalazione dello stress metabolico e può influenzare la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e l’adattamento bioenergetico durante l’ipossia o l’eccesso di nutrienti. Un’espressione o un’attività deregolata di PDK2 è stata associata ad alterazioni della sensibilità all’insulina, al rimodellamento metabolico e a fenotipi proliferativi osservati in diversi contesti patologici, a supporto del suo impiego come nodo per interrogare i meccanismi di controllo metabolico.
PDK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.