Pax-9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403899-ACT

PAX9 codifica il fattore di trascrizione della famiglia paired box Pax-9, un regolatore nucleare legante il DNA indispensabile per la definizione dei pattern embrionali e l’organogenesi, in particolare per lo sviluppo cranio-facciale e dentale, nonché del timo e delle paratiroidi. Pax-9 modula i programmi di specificazione di linea coordinando reti trascrizionali con altri regolatori dello sviluppo, influenzando lo stato della cromatina e l’espressione dei geni di differenziamento a valle. Alterazioni del dosaggio o della funzione di PAX9 sono state associate ad agenesia dentale congenita e ad altre anomalie dello sviluppo cranio-facciale, rendendolo un nodo rilevante per lo studio della morfogenesi e del controllo del destino cellulare. Nei contesti dell’adulto e della malattia, la deregolazione dell’espressione di PAX9 è oggetto di studio come marcatore e modulatore degli stati di differenziamento epiteliale e della riprogrammazione trascrizionale.

Pax-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PAX9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Pax-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PAX9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PAX9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Pax-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PAX9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Pax-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Pax-9 nelle cellule tumorali con espressione di PAX9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.