Pax-7 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422120-ACT

Il gene murino Pax7 codifica il fattore di trascrizione Pax-7 della famiglia paired box, un regolatore centrale della specificazione, della quiescenza e dell’autorinnovamento delle cellule satelliti del muscolo scheletrico durante lo sviluppo e la rigenerazione nell’adulto. Pax-7 coordina i programmi genici miogenici interfacciandosi con il rimodellamento della cromatina e con reti trascrizionali che determinano il destino di linea, influenzando l’equilibrio tra proliferazione e differenziamento. Un’alterata attività di Pax-7 compromette l’omeostasi muscolare ed è ampiamente studiata in contesti di rigenerazione compromessa, modelli di atrofia e distrofia muscolare e nella biologia del rabdomiosarcoma, in cui i programmi di identità miogenica risultano deregolati. In quanto regolatore dello sviluppo, Pax-7 viene anche utilizzato per indagare le decisioni di destino delle cellule staminali e le vie di riparazione tissutale nei sistemi murini.

Pax-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Pax7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Pax-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Pax7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Pax7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Pax-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Pax7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Pax-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Pax-7 nelle cellule tumorali con espressione di Pax7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.