Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PAR-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401719
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PAR-4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PAR-4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PAR-4 Antibody (5F4): sc-293206
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PAR-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401719 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
F2RL3 codifica il recettore attivato da proteasi 4 (PAR-4), un recettore accoppiato a proteine G sensibile alla trombina che trasduce segnali extracellulari mediati da proteasi in mobilizzazione intracellulare del calcio e cascate di chinasi. PAR-4 si accoppia alle vie Gq e G12/13 per regolare la segnalazione di PLCβ, il rimodellamento del citoscheletro dipendente da RhoA e i programmi a valle di MAPK e NF-κB che modellano gli stati di attivazione cellulare. Nelle piastrine umane e nelle cellule associate al compartimento vascolare, PAR-4 contribuisce alla segnalazione emostatica e infiammatoria e si interfaccia con vie legate alla coagulazione che influenzano l’adesione cellulare e le risposte di barriera. Un’attività alterata di F2RL3/PAR-4 è stata studiata in contesti quali la biologia della trombosi, l’infiammazione vascolare e la segnalazione associata al microambiente tumorale, in cui segnali proteasici modulano proliferazione e motilità.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAR-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene F2RL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del F2RL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto F2RL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAR-4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di F2RL3 per lo studio della segnalazione di PAR-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni F2RL3 critici per la funzione di PAR-4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di F2RL3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PAR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PAR-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus F2RL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PAR-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PAR-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia F2RL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio F2RL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.