PALM2-AKAP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407117

Panoramica

PALM2-AKAP2 è un gene di fusione umano che dà origine a una proteina chimerica che combina caratteristiche di paralemmin-2 (PALM2), una fosfoproteina associata alla membrana implicata nel rimodellamento dell’actina e nella crescita dei neuriti, con la proteina 2 di ancoraggio della chinasi A (AKAP2), uno scaffold che organizza spazialmente la segnalazione della protein-chinasi A (PKA) dipendente da cAMP. Ancorando le attività di chinasi e fosfatasi a microdomini subcellulari definiti, PALM2-AKAP2 è in grado di influenzare la segnalazione cAMP/PKA compartimentalizzata, la dinamica del citoscheletro e il traffico di membrana. Un’espressione alterata o riarrangiamenti che coinvolgono questo locus sono stati esaminati nel contesto di una segnalazione deregolata e di cambiamenti dell’architettura cellulare rilevanti per la biologia dei tumori e per i processi di neurosviluppo. In quanto nodo di segnalazione legato a uno scaffold, è utile per studiare come la segnalazione chinasi localizzata si integri con programmi di adesione, motilità e morfologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PALM2-AKAP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PALM2-AKAP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PALM2-AKAP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PALM2-AKAP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PALM2-AKAP2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PALM2-AKAP2 per lo studio della segnalazione di PALM2-AKAP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PALM2-AKAP2 critici per la funzione di PALM2-AKAP2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PALM2-AKAP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PALM2-AKAP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PALM2-AKAP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PALM2-AKAP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PALM2-AKAP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PALM2-AKAP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.