p38 gamma MAPK12 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424361-ACT

Mapk12 codifica p38 gamma (MAPK12), una chinasi proteica attivata dallo stress appartenente alla famiglia delle MAPK (mitogen-activated protein kinase), che integra segnali extracellulari per regolare programmi trascrizionali responsabili del controllo della differenziazione cellulare, del metabolismo e della sopravvivenza. p38 gamma partecipa a reti di segnalazione MAPK a valle di citochine infiammatorie e di stress ambientali, influenzando cascate di fosforilazione che modellano l’espressione genica e la dinamica del citoscheletro. Nei sistemi murini, l’attività di MAPK12 è stata collegata a risposte tessuto-specifiche nel muscolo scheletrico e a vie di segnalazione rilevanti per il sistema immunitario, rendendola utile per studiare l’adattamento allo stress e il crosstalk tra chinasi dipendente dal contesto. La deregolazione della segnalazione della via p38 è spesso analizzata in modelli di infiammazione, squilibrio metabolico e rimodulazione della segnalazione associata al cancro, in cui MAPK12 può agire come nodo in grado di modulare ampiezza e specificità della via.

p38 gamma MAPK12 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mapk12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

p38 gamma MAPK12 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mapk12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mapk12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p38 gamma MAPK12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mapk12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p38 gamma MAPK12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p38 gamma MAPK12 nelle cellule tumorali con espressione di Mapk12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.