p300 Plasmide Double Nickase (h): sc-400055-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p300 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p300 Double Nickase Plasmid (h) e il p300 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EP300. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p300 Antibody (F-4): sc-48343
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p300 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400055-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p300 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400055-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EP300 codifica p300, un coattivatore trascrizionale pleiotropico e un’acetiltransferasi degli istoni che acetila residui di lisina su istoni e su numerosi fattori di trascrizione, modulando l’accessibilità della cromatina e i programmi di espressione genica. p300 integra segnali provenienti da vie di sviluppo e di risposta allo stress, tra cui la trascrizione dipendente da p53, HIF-1, NF-κB, TGF-β/SMAD e dai recettori nucleari, influenzando così il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione, le risposte al danno al DNA e l’adattamento metabolico. In quanto regolatore epigenetico centrale, l’alterazione di EP300 è associata a un’ampia disregolazione trascrizionale osservata in diversi contesti tumorali e a fenotipi neuroevolutivi, a riflesso del suo ruolo nell’attività degli enhancer e nella regolazione genica specifica di linea cellulare. Queste caratteristiche rendono p300 un nodo ampiamente utilizzato per analizzare il controllo della trascrizione mediato dalla cromatina e le reti di regolazione genica dipendenti dai segnali.
p300 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EP300 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EP300. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EP300. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EP300 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.