P2Y5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426423

Panoramica

Lpar6 codifica il recettore P2Y5, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) responsivo all’acido lisofosfatidico (LPA), implicato nel riconoscimento dei mediatori lipidici e nella trasduzione del segnale a valle attraverso vie che regolano la dinamica del citoscheletro, la polarità cellulare e il differenziamento. Nei tessuti murini, l’attività di P2Y5 collega l’LPA extracellulare a reti intracellulari di secondi messaggeri che possono influenzare gli output di segnalazione di MAPK e delle GTPasi della famiglia Rho, plasmando processi quali l’organizzazione epiteliale e la biologia del follicolo pilifero. Studi genetici e funzionali associano LPAR6/P2Y5 a fenotipi di crescita dei capelli e allo sviluppo ectodermico, e un’alterata segnalazione dei recettori per LPA è ampiamente rilevante in microambienti infiammatori e fibrotici. Di conseguenza, Lpar6 rappresenta un utile punto di ingresso per analizzare la segnalazione lipidica guidata da GPCR e i suoi effetti sul comportamento cellulare in modelli fisiologicamente rilevanti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lpar6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lpar6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lpar6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P2Y5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lpar6 per lo studio della segnalazione di P2Y5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lpar6 critici per la funzione di P2Y5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lpar6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P2Y5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal P2Y5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lpar6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P2Y5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR P2Y5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lpar6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lpar6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.