p130 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422615

Panoramica

Il gene murino Rbl2 codifica la proteina simile al retinoblastoma p130 (RBL2), una “pocket protein” che collabora con E2F4/5 e con i complessi DREAM per reprimere la trascrizione e favorire l’uscita dal ciclo cellulare. p130 integra segnali derivanti dall’attività dei complessi CDK-ciclina e dal rimodellamento, dipendente dalla fosforilazione, dei complessi della famiglia RB per regolare la transizione G0/G1, la quiescenza e i programmi di differenziamento. Attraverso queste vie, Rbl2 influenza il controllo dei checkpoint, la repressione associata alla cromatina e la stabilità di linea cellulare, risultando quindi rilevante per gli studi sul controllo della proliferazione e sulla deregolazione oncogenica. L’alterazione della funzione della via di RB, che compromette la repressione di E2F mediata da p130, è spesso analizzata in modelli di cancro, senescenza e omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO p130 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rbl2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rbl2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rbl2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina p130.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rbl2 per lo studio della segnalazione di p130, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rbl2 critici per la funzione di p130
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rbl2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal p130 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal p130 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rbl2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal p130 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR p130 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rbl2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rbl2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.