P-Selectin/CD62P/SELP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400441-ACT

SELP codifica la P-selectina (CD62P), un recettore di adesione inducibile immagazzinato nei granuli α delle piastrine e nei corpi di Weibel–Palade dell’endotelio, ed esposto rapidamente sulla superficie cellulare in seguito all’attivazione. La P-selectina di superficie si lega a PSGL-1 sui leucociti per avviare l’ancoraggio e il rotolamento, coordinando le prime fasi del reclutamento leucocitario durante l’infiammazione e collegando il danno vascolare alle risposte tromboinfiammatorie. Attraverso la regolazione delle interazioni piastrina–leucocita ed endotelio–leucocita, SELP influenza la segnalazione associata alla coagulazione, l’attivazione endoteliale guidata da citochine e il rimodellamento del microambiente vascolare. Un’espressione e un’attività dis-regolate della P-selectina sono associate a patologie vascolari infiammatorie, a processi legati alla trombosi e a interazioni piastrine–tumore che incidono sulla biologia della metastasi.

P-Selectin/CD62P/SELP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

P-Selectin/CD62P/SELP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di P-Selectin/CD62P/SELP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da P-Selectin/CD62P/SELP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via P-Selectin/CD62P/SELP nelle cellule tumorali con espressione di SELP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.