Oxytocin-R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400641

Panoramica

OXTR codifica il recettore umano dell’ossitocina (Oxytocin-R), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, la produzione di inositolo trifosfato e la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare, con ulteriore segnalazione dipendente dal contesto attraverso le vie MAPK/ERK e PI3K. Oxytocin-R regola la contrattilità della muscolatura liscia, la secrezione neuroendocrina e la segnalazione sinaptica che influenzano il comportamento sociale e le risposte allo stress. In contesti immunitari e stromali, la segnalazione di OXTR può modulare il rilascio di citochine, la migrazione cellulare e i programmi di rimodellamento tissutale. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di OXTR sono state studiate in fenotipi neuroevolutivi e psichiatrici, in disturbi della biologia riproduttiva e nei tumori, in cui vie guidate dai GPCR contribuiscono alla proliferazione e alle interazioni con il microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Oxytocin-R (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OXTR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OXTR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OXTR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Oxytocin-R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OXTR per lo studio della segnalazione di Oxytocin-R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OXTR critici per la funzione di Oxytocin-R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OXTR per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Oxytocin-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Oxytocin-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OXTR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Oxytocin-R Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Oxytocin-R (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OXTR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OXTR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.