Orai1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400901-NIC

ORAI1 codifica Orai1, la subunità formante il poro del canale del calcio attivato dal rilascio di calcio (CRAC) che media l’ingresso di Ca²⁺ operato dalle riserve (store-operated) in seguito all’esaurimento dei depositi di Ca²⁺ del reticolo endoplasmatico. Orai1 coopera con STIM1 per collegare il rilevamento del Ca²⁺ nel RE all’apertura dei canali sulla membrana plasmatica, plasmando segnali di calcio citosolico che regolano la trascrizione dipendente da NFAT, i programmi di attivazione cellulare e l’omeostasi del calcio. Questa via è centrale nella segnalazione delle cellule immunitarie, nella secrezione e in processi più ampi regolati dal calcio, come proliferazione e migrazione. Un’attività deregolata di ORAI1 è stata associata a disfunzioni immunitarie e fenotipi infiammatori, e le alterazioni della segnalazione dell’influsso di Ca²⁺ sono state studiate anche in contesti quali miopatie e reti di segnalazione associate al cancro.

Orai1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ORAI1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ORAI1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ORAI1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ORAI1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.