Olfr713 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-435112-ACT

Olfr713 (topo) codifica un recettore olfattivo appartenente alla superfamiglia dei GPCR di classe A tipo rodopsina, che contribuisce al rilevamento degli odoranti e alla trasduzione dei segnali chemosensoriali nei neuroni sensoriali olfattivi. In seguito al legame con il ligando, i recettori olfattivi si accoppiano a proteine G eterotrimeriche per regolare l’attività dell’adenilil ciclasi, la produzione di cAMP, l’apertura dei canali regolati da nucleotidi ciclici e la successiva depolarizzazione neuronale. L’espressione e la funzione di Olfr713 sono rilevanti per studi sull’identità dei neuroni sensoriali, sul traffico dei recettori e sui meccanismi di desensibilizzazione dei GPCR che modellano la codifica olfattiva. La disregolazione delle vie dei recettori olfattivi è spesso utilizzata come indicatore a livello di sistema in modelli di neuroinfiammazione, neurodegenerazione ed esposizione ambientale, in cui un’alterata segnalazione chemosensoriale può riflettere cambiamenti più ampi nello stato neuronale.

Olfr713 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Olfr713 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Olfr713 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Olfr713 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Olfr713, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Olfr713. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Olfr713 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Olfr713 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Olfr713 nelle cellule tumorali con espressione di Olfr713 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.