Nup88 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422392

Panoramica

Nup88 (nucleoporina 88 kDa) è un componente essenziale del complesso del poro nucleare che contribuisce al trasporto nucleocitoplasmatico e all’organizzazione complessiva dell’involucro nucleare. Associandosi ad altre nucleoporine e ai recettori di trasporto, Nup88 aiuta a regolare il traffico di proteine e RNA che controllano i programmi trascrizionali, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione in risposta allo stress. Un’alterata abbondanza o localizzazione di Nup88 è stata collegata a difetti nella fedeltà del trasporto nucleare e nel mantenimento del genoma, processi spesso perturbati in contesti proliferativi e dello sviluppo neurobiologico. Nup88 murino è quindi ampiamente utilizzato per studiare la regolazione, dipendente dal poro nucleare, della segnalazione e dell’espressione genica nella fisiologia normale e in stati cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nup88 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nup88 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nup88 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nup88 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nup88.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nup88 per lo studio della segnalazione di Nup88, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nup88 critici per la funzione di Nup88
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nup88 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nup88 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nup88 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nup88. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nup88 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nup88 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nup88 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nup88 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.