Nrf3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404543-ACT

Il gene umano **NFE2L3** codifica per il fattore di trascrizione **CNC-bZIP Nrf3**, un membro della famiglia *cap ‘n’ collar* che coordina programmi di espressione genica legati all’adattamento allo stress cellulare e all’omeostasi tissutale. Nrf3 integra segnali redox e di proteostasi per modulare reti trascrizionali coinvolte nel metabolismo, nella differenziazione e nella regolazione del sistema ubiquitina–proteasoma, intersecando le vie di segnalazione associate agli *antioxidant response element* (ARE). Attraverso queste vie, Nrf3 contribuisce a un controllo dipendente dal contesto di proliferazione e sopravvivenza ed è frequentemente studiato per la sua espressione o attività alterata nella biologia dei tumori e in altri disturbi caratterizzati da una segnalazione di risposta allo stress deregolata. Il suo output trascrizionale nucleare rende **NFE2L3** un nodo utile per mappare circuiti regolatori che collegano lo stress ambientale al rimodellamento trascrizionale su scala genomica.

Nrf3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NFE2L3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nrf3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NFE2L3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NFE2L3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nrf3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NFE2L3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nrf3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nrf3 nelle cellule tumorali con espressione di NFE2L3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.