Nrf2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421869-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nrf2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nrf2 Double Nickase Plasmid (m) e il Nrf2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nfe2l2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nrf2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nrf2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Nfe2l2 codifica Nrf2, un fattore di trascrizione bZIP che coordina la difesa cellulare contro lo stress elettrofilo e ossidativo legandosi agli elementi di risposta antiossidante (ARE) e inducendo geni coinvolti in detossificazione, controllo del redox e proteostasi. In condizioni basali, l’attività di Nrf2 è limitata tramite ubiquitinazione dipendente da KEAP1 e degradazione proteasomiale, mentre i segnali di stress stabilizzano Nrf2 rimodellando i programmi trascrizionali relativi al metabolismo del glutatione, alla rigenerazione di NADPH e alle vie di eliminazione degli xenobiotici. La segnalazione di Nrf2 interseca reti infiammatorie e metaboliche, includendo il cross-talk con NF-κB e l’omeostasi mitocondriale, plasmando risposte adattative a stressori ambientali ed endogeni. La disregolazione dell’asse KEAP1–Nrf2 è implicata in modelli di cancerogenesi, stati infiammatori cronici, neurodegenerazione e disfunzione metabolica, rendendo Nfe2l2 un bersaglio comune per studi meccanicistici sulla resilienza allo stress e sulla biologia redox.
Nrf2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nfe2l2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nfe2l2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nfe2l2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nfe2l2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.