Npl4 Plasmide Double Nickase (h): sc-403787-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Npl4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Npl4 Double Nickase Plasmid (h) e il Npl4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NPLOC4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Npl4 Antibody (D-1): sc-365796
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Npl4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Npl4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NPLOC4 codifica Npl4, un cofattore centrale del complesso ATPasico AAA+ p97/VCP, che riconosce i substrati poliubiquitinati e accoppia l’estrazione dipendente dall’ubiquitina alla degradazione proteasomiale. Attraverso il suo ruolo nella degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD), nel controllo qualità associato ai ribosomi e nel turnover delle proteine associate alla cromatina, Npl4 contribuisce a mantenere la proteostasi durante lo stress cellulare e a sostenere la stabilità del genoma. L’alterazione dell’asse p97–UFD1–Npl4 compromette la segnalazione dell’ubiquitina e può modificare le risposte allo stress proteotossico, alle esigenze di riparazione del DNA e alla progressione del ciclo cellulare, rendendo NPLOC4 un nodo utile per lo studio delle reti di controllo qualità proteico. Una regolazione aberrante di questa via è stata collegata, in sistemi sperimentali, a fenotipi rilevanti per neurodegenerazione e cancro attraverso effetti sull’omeostasi proteica e sulla segnalazione adattativa allo stress.
Npl4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NPLOC4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NPLOC4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NPLOC4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NPLOC4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.