Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421951
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NP1 Antibody (B-8): sc-374199
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421951 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La pentraxina neuronale 1 (Nptx1; NP1) è una pentraxina neuronale secreta, arricchita nelle sinapsi eccitatorie, dove contribuisce al rimodellamento sinaptico dipendente dall’attività e all’organizzazione della segnalazione glutammatergica. NP1 partecipa a reti proteiche extracellulari che influenzano il clustering dei recettori AMPA e la stabilizzazione sinaptica, collegando l’attività neuronale al perfezionamento dei circuiti e alla plasticità. Nei sistemi murini, la regolazione di Nptx1 è stata associata a processi quali la sinaptogenesi, la crescita dei neuriti e le cascate di segnalazione calcio-dipendenti che modellano la connettività in funzione dell’esperienza. Alterazioni dell’espressione di NP1 e della dinamica della via delle pentraxine neuronali sono state implicate in fenotipi legati alla neurodegenerazione e alle crisi epilettiche, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici della disfunzione sinaptica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nptx1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nptx1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nptx1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nptx1 per lo studio della segnalazione di NP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Nptx1 critici per la funzione di NP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nptx1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nptx1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nptx1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nptx1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.