NOK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433993

Panoramica

La serina/treonina/tirosina chinasi 1 (Styk1), nota anche come NOK, codifica una proteina chinasi simile a un recettore, implicata nella regolazione della segnalazione responsiva ai fattori di crescita e del comportamento delle cellule epiteliali. Nei sistemi murini, NOK è stata collegata alla modulazione degli output delle vie MAPK/ERK e PI3K/AKT, che influenzano proliferazione, sopravvivenza e fenotipi di trasformazione cellulare. Un’attività alterata di STYK1/NOK è stata associata a contesti di segnalazione oncogenica, rendendola rilevante per studi meccanicistici della biologia dei tumori e del rimodellamento delle reti guidato dalle chinasi. Queste caratteristiche rendono Styk1 un nodo utile per analizzare il cross-talk tra chinasi recettoriali, gli eventi di fosforilazione a valle e i programmi di segnalazione adattativi allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NOK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Styk1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Styk1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Styk1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NOK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Styk1 per lo studio della segnalazione di NOK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Styk1 critici per la funzione di NOK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Styk1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NOK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NOK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Styk1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NOK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NOK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Styk1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Styk1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.