Nkx-2.2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421901

Panoramica

Nkx2-2 codifica il fattore di trascrizione homeobox Nkx-2.2, un regolatore nucleare essenziale per il patterning embrionale e la specificazione di linea nel sistema nervoso centrale in sviluppo e nei tessuti derivati dall’endoderma. Nel tubo neurale ventrale, Nkx-2.2 agisce a valle della segnalazione Sonic hedgehog per stabilire domini di progenitori e guidare programmi di differenziamento, coordinando reti regolatorie geniche che plasmano l’identità dei sottotipi neuronali. Nel pancreas, Nkx-2.2 contribuisce allo sviluppo e alla maturazione delle cellule endocrine controllando programmi trascrizionali legati all’assegnazione delle linee cellulari delle isole pancreatiche e all’espressione ormonale. La disregolazione dei circuiti trascrizionali dipendenti da NKX2-2 è stata associata a traiettorie neuro-sviluppative alterate e a perturbazioni del differenziamento endocrino, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi di biologia dello sviluppo e di modellazione delle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-2.2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nkx2-2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nkx2-2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nkx2-2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nkx-2.2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nkx2-2 per lo studio della segnalazione di Nkx-2.2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nkx2-2 critici per la funzione di Nkx-2.2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nkx2-2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nkx2-2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nkx-2.2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nkx-2.2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nkx2-2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nkx2-2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.