Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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NFS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403102-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NFS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NFS1 Double Nickase Plasmid (h) e il NFS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NFS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NFS1 Antibody (B-7): sc-365308
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NFS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403102-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NFS1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403102-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFS1 codifica una desolfurasi della cisteina che avvia la biogenesi de novo dei cluster ferro–zolfo (Fe–S) nei mitocondri mobilizzando lo zolfo dalla L-cisteina e trasferendolo al macchinario di assemblaggio ISC. Attraverso questa via, NFS1 sostiene la maturazione di enzimi dipendenti dai Fe–S coinvolti nella fosforilazione ossidativa, nel metabolismo dell’acido lipoico e nel mantenimento dell’integrità del genoma mitocondriale e nucleare. Alterazioni di NFS1 possono compromettere la respirazione mitocondriale e l’omeostasi redox, con effetti a valle sulla proliferazione cellulare e sulle risposte allo stress. Studi genetici e funzionali collegano un assemblaggio compromesso dei cluster Fe–S a fenotipi di malattie mitocondriali multisistemiche, rendendo NFS1 un bersaglio chiave per indagini meccanicistiche sulla vulnerabilità metabolica e sul mantenimento del genoma.
NFS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NFS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NFS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NFS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NFS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.