NF90 Plasmide Double Nickase (h): sc-402626-NIC

ILF3 codifica NF90, una proteina legante l’RNA a doppio filamento che svolge un ruolo nella regolazione genica post-trascrizionale modulando la stabilità dell’mRNA, lo splicing, l’esportazione nucleare e la traduzione, spesso in collaborazione con NF45 e altri partner ribonucleoproteici. NF90 partecipa alle risposte antivirali innate e ai programmi di adattamento allo stress influenzando i trascritti correlati all’interferone e le vie del metabolismo dell’RNA, e può inoltre incidere sul controllo del ciclo cellulare tramite la regolazione selettiva di mRNA associati alla crescita. Attraverso le sue interazioni con i macchinari di trascrizione e di processamento dell’RNA, NF90 contribuisce a coordinare programmi di espressione genica legati a proliferazione, differenziamento e segnalazione dello stress cellulare. La disregolazione di ILF3/NF90 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi dell’RNA in contesti rilevanti per la biologia tumorale e per fenotipi infiammatori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione guidata dall’RNA.

NF90 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ILF3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ILF3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ILF3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ILF3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.