NF-L Plasmide Double Nickase (h): sc-402254-NIC

NEFL codifica la catena leggera del neurofilamento (NF-L), una proteina fondamentale dei filamenti intermedi che si assembla con NEFM e NEFH per formare i neurofilamenti, i quali determinano il calibro assonale e supportano il trasporto assonale a lunga distanza. NF-L si integra con i processi di rimodellamento del citoscheletro che coordinano il traffico dipendente da microtubuli e actina, influenzando la morfologia neuronale, le proprietà di conduzione e la resilienza strutturale. Un’espressione alterata di NEFL, difetti di assemblaggio o una dinamica dei filamenti dipendente dalla fosforilazione deregolata sono associati ad assonopatie e fenotipi neurodegenerativi, rendendo NF-L un indicatore molecolare ampiamente utilizzato di danno neuronale e stress del citoscheletro. Nei sistemi neurali umani, NEFL viene comunemente studiato in vie che regolano la crescita dei neuriti, il mantenimento sinaptico e le risposte alle alterazioni della proteostasi.

NF-L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEFL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEFL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEFL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEFL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.