Neurogenin 3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403619-ACT

NEUROG3 (Neurogenin 3) è un fattore di trascrizione della famiglia basic helix–loop–helix che agisce come regolatore maestro della specificazione delle linee endocrine, in particolare durante lo sviluppo del pancreas, dove promuove l’impegno dei progenitori endocrini e la loro differenziazione. Legandosi ai motivi E-box e coordinando reti trascrizionali con vie quali l’inibizione laterale mediata da Notch, NEUROG3 contribuisce a controllare l’equilibrio tra il mantenimento dei progenitori e le decisioni di destino endocrino. La sua attività influenza l’emergere dei programmi cellulari che producono insulina, glucagone e somatostatina, rendendolo centrale negli studi sulla formazione delle isole pancreatiche e sull’identità delle cellule endocrine. Alterazioni della funzione o dell’espressione di NEUROG3 sono associate a disturbi congeniti dello sviluppo enteroendocrino e dell’endocrino pancreatico e vengono spesso investigate in modelli di insufficienza delle cellule β correlata al diabete e di disfunzione endocrina gastrointestinale.

Neurogenin 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NEUROG3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Neurogenin 3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NEUROG3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NEUROG3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Neurogenin 3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NEUROG3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Neurogenin 3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Neurogenin 3 nelle cellule tumorali con espressione di NEUROG3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.