nephrin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400368

Panoramica

NPHS1 codifica la nefrina, una proteina transmembrana della superfamiglia delle immunoglobuline essenziale per l’architettura e le funzioni di segnalazione del diaframma di filtrazione (slit diaphragm) dei podociti nel glomerulo renale. La nefrina partecipa all’organizzazione delle giunzioni cellula-cellula e alla regolazione del citoscheletro di actina attraverso interazioni con proteine adattatrici e vie a valle dipendenti dalla fosforilazione, contribuendo a mantenere l’integrità della barriera di filtrazione. L’alterazione di NPHS1 compromette la struttura dello slit diaphragm, modifica l’adesione dei podociti e i segnali di sopravvivenza, ed è associata a fenotipi renali proteinurici, inclusa la sindrome nefrosica congenita. NPHS1 è quindi un bersaglio chiave per lo studio della biologia dei podociti, della dinamica della barriera di filtrazione e dei meccanismi di segnalazione delle giunzioni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO nephrin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NPHS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NPHS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NPHS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina nephrin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NPHS1 per lo studio della segnalazione di nephrin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NPHS1 critici per la funzione di nephrin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NPHS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal nephrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal nephrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NPHS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal nephrin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR nephrin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NPHS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NPHS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.