NEDD8 Plasmide Double Nickase (h): sc-417924-NIC

NEDD8 codifica un modificatore simile all’ubiquitina che viene coniugato covalentemente ai substrati nella via della neddilazione, in particolare alle proteine della famiglia delle culline che fungono da impalcatura per le ligasi E3 dell’ubiquitina cullina–RING (CRL). La coniugazione di NEDD8 regola il turnover proteico, la progressione del ciclo cellulare, la replicazione e la riparazione del DNA e la segnalazione di stress modulando l’attività delle CRL e, a valle, la proteostasi dipendente dall’ubiquitina. L’alterazione della neddilazione modifica il controllo dei checkpoint, la stabilità del genoma e i programmi trascrizionali, collegando la disregolazione della via di NEDD8 a fenotipi proliferativi e a un rimodellamento della segnalazione osservati in molteplici contesti patologici. In quanto nodo centrale delle modificazioni post-traduzionali di tipo ubiquitina-like, NEDD8 è ampiamente studiato in proteomica, mappatura di vie di segnalazione e screening di genomica funzionale.

NEDD8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEDD8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEDD8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEDD8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEDD8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.