NBR1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421827-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NBR1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NBR1 Double Nickase Plasmid (m) e il NBR1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nbr1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NBR1 Antibody (4BR): sc-130380
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NBR1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NBR1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Nbr1 codifica NBR1, un recettore selettivo dell’autofagia che riconosce il carico ubiquitinato tramite il dominio UBA e interagisce con le proteine LC3/GABARAP attraverso un motivo LIR, favorendo il reclutamento verso l’autofagosoma. NBR1 agisce insieme a p62/SQSTM1 nell’aggrefoagia e contribuisce alla proteostasi, al controllo di qualità degli organelli e alle risposte allo stress che modulano la sopravvivenza cellulare e la segnalazione infiammatoria. Attraverso interazioni con il traffico dipendente dall’ubiquitina e con le vie autofagia–lisosoma, NBR1 influenza la rimozione di aggregati proteici e di componenti cellulari danneggiati. La disregolazione di questi processi è rilevante per la ricerca su neurodegenerazione, stress metabolico e biologia tumorale, ambiti in cui sono comuni un flusso autofagico compromesso e un’alterata segnalazione dell’ubiquitina.
NBR1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nbr1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nbr1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nbr1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nbr1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.