NAT-8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411236-ACT

Il gene umano **NAT8** codifica **NAT-8**, una N-acetiltransferasi arricchita in rene e fegato, localizzata principalmente nelle membrane del reticolo endoplasmatico, che catalizza reazioni di N-acetilazione influenzando la gestione di piccole molecole e xenobiotici. L’attività di NAT-8 è collegata all’omeostasi metabolica e ai processi di detossificazione cellulare, intersecandosi con vie che influenzano le risposte allo stress ossidativo e la funzione dell’epitelio tubulare. Varianti genetiche e alterazioni dell’espressione di NAT8 sono state associate a caratteristiche renali e alla suscettibilità al danno renale, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici su nefrotossicità e stress metabolico. Nei modelli cellulari, l’espressione di NAT-8 può modulare fenotipi legati al trasporto epiteliale, alla resilienza cellulare all’esposizione chimica e a programmi trascrizionali associati al danno.

NAT-8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NAT8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NAT-8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NAT8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NAT8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NAT-8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NAT8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NAT-8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NAT-8 nelle cellule tumorali con espressione di NAT8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.