NAT-8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411236-ACT

O NAT8 humano codifica a NAT-8, uma N-acetiltransferase enriquecida em rim e fígado, localizada principalmente nas membranas do retículo endoplasmático, que catalisa reações de N-acetilação com impacto no processamento de pequenas moléculas e de xenobióticos. A atividade da NAT-8 está ligada à homeostase metabólica e a processos celulares de desintoxicação, cruzando-se com vias que influenciam respostas ao estresse oxidativo e a função do epitélio tubular. Variações genéticas e alterações na expressão de NAT8 têm sido associadas a características renais e à suscetibilidade a lesão renal, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de nefrotoxicidade e estresse metabólico. Em modelos celulares, a expressão de NAT-8 pode modular fenótipos relacionados ao transporte epitelial, à resiliência celular à exposição a compostos químicos e a programas transcricionais associados a lesão.

NAT-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NAT8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NAT-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NAT8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NAT8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NAT-8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NAT8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NAT-8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NAT-8 em células tumorais com expressão de NAT8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.