Na⁺ CP type IIIα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406612

Panoramica

SCN3A codifica il canale del sodio umano voltaggio‑dipendente Na⁺ CP di tipo IIIα, una subunità α formante il poro che sostiene il rapido e transitorio ingresso di Na⁺ necessario per l’inizio e la propagazione del potenziale d’azione nelle cellule eccitabili. Il gating del canale e la sua localizzazione di membrana si integrano con le reti che regolano l’eccitabilità neuronale, inclusa la modulazione delle soglie di depolarizzazione, della frequenza di scarica e della segnalazione dipendente dall’attività. La funzione di SCN3A si interfaccia con percorsi più ampi di omeostasi ionica e trasmissione sinaptica, in cui correnti di sodio alterate possono perturbare lo sviluppo dei circuiti e l’eccitabilità. La disregolazione genetica e funzionale di SCN3A è stata collegata a fenotipi neuroevolutivi e correlati alle crisi epilettiche, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulle canalopatie e sulla disfunzione elettrofisiologica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Na+ CP type IIIα (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SCN3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SCN3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SCN3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Na+ CP type IIIα.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SCN3A per lo studio della segnalazione di Na+ CP type IIIα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SCN3A critici per la funzione di Na+ CP type IIIα
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SCN3A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Na+ CP type IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SCN3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Na+ CP type IIIα Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Na+ CP type IIIα (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SCN3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SCN3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.