NAP1L3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407403

Panoramica

NAP1L3 (nucleosome assembly protein 1-like 3) è uno chaperone degli istoni della famiglia NAP1 implicato nell’assemblaggio e nel disassemblaggio dei nucleosomi, supportando la dinamica della cromatina durante la replicazione del DNA, la trascrizione e la riparazione del DNA. Modulando la deposizione e lo scambio degli istoni H2A–H2B, NAP1L3 può influenzare la regolazione epigenetica, la stabilità del genoma e le transizioni dello stato cellulare legate ai programmi di differenziamento. Un rimodellamento alterato della cromatina e un’attività deregolata degli chaperoni degli istoni sono spesso associati a reti trascrizionali disfunzionali osservate nel cancro e nei disturbi dello sviluppo, rendendo NAP1L3 un nodo utile per studi meccanicistici. L’analisi della funzione di NAP1L3 può aiutare a definire come le vie di assemblaggio della cromatina si interfaccino con le risposte allo stress replicativo e con il controllo trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NAP1L3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NAP1L3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NAP1L3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NAP1L3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NAP1L3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NAP1L3 per lo studio della segnalazione di NAP1L3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NAP1L3 critici per la funzione di NAP1L3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NAP1L3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NAP1L3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NAP1L3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NAP1L3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NAP1L3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NAP1L3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NAP1L3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NAP1L3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.