Nanog Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418033-ACT

Il gene umano **NANOG** codifica per il fattore di trascrizione homeobox Nanog, un regolatore centrale della pluripotenza che mantiene l’autorinnovamento delle cellule staminali embrionali e sopprime l’impegno verso linee di differenziamento. Nanog opera all’interno della rete core della pluripotenza insieme a OCT4 e SOX2, coordinando programmi trascrizionali e stati della cromatina che influenzano la differenziazione, il rimodellamento epigenetico e le decisioni di destino cellulare. Un’espressione deregolata di **NANOG** è associata a fenotipi simil-staminali, a un’alterazione della segnalazione dello sviluppo e a riprogrammazione trascrizionale osservate in diversi modelli di malattia, inclusi contesti di biologia del cancro in cui si studiano la plasticità delle cellule tumorali e stati associati alla resistenza. In quanto fattore nucleare che lega il DNA, Nanog rappresenta un nodo accessibile per interrogare i circuiti trascrizionali alla base dello sviluppo e dell’identità cellulare.

Nanog Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NANOG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nanog Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NANOG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NANOG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nanog. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NANOG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nanog nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nanog nelle cellule tumorali con espressione di NANOG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.