MYL10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413972-ACT

MYL10 codifica la catena leggera della miosina 10, un componente regolatorio del citoscheletro actomiosinico che modula l’attività motoria della miosina e contribuisce alla generazione di forza. Attraverso un controllo dipendente dalla fosforilazione della funzione della miosina II, MYL10 partecipa a processi di rimodellamento del citoscheletro che influenzano forma cellulare, contrattilità, adesione e motilità. Questi meccanismi si intersecano con vie che regolano la dinamica dell’actina e la segnalazione contrattile dipendente da Rho/ROCK, rendendo MYL10 rilevante per studi sull’organizzazione tissutale e sui comportamenti cellulari regolati da stimoli meccanici. Un’alterata regolazione della contrattilità del citoscheletro è spesso associata a migrazione aberrante e fenotipi invasivi, a supporto dell’indagine di MYL10 in modelli rilevanti per la malattia in cui la tensione actomiosinica è disregolata.

MYL10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYL10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYL10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYL10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYL10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYL10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYL10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYL10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYL10 nelle cellule tumorali con espressione di MYL10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.