MYH6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400351-ACT

MYH6 codifica la catena pesante alfa della miosina cardiaca, un componente fondamentale del filamento spesso di miosina II che alimenta l’accorciamento del sarcomero attraverso il ciclo dei ponti trasversali actina–miosina dipendente dall’ATP. Nel miocardio umano, MYH6 contribuisce alla cinetica contrattile, alla generazione di forza e a un accoppiamento eccitazione–contrazione coordinato grazie alle interazioni con proteine sarcomeriche regolatorie e strutturali. L’espressione di MYH6 e l’equilibrio tra isoforme sono strettamente regolati durante lo sviluppo e in risposta allo stress emodinamico, collegandolo a vie che governano la miofibrillogenesi e il rimodellamento cardiaco. La variazione genetica o la disregolazione di MYH6 è stata associata a cardiomiopatie ereditarie e a fenotipi cardiaci congeniti, rendendolo un bersaglio frequente negli studi meccanicistici della funzione cardiaca.

MYH6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYH6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYH6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYH6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYH6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYH6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYH6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYH6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYH6 nelle cellule tumorali con espressione di MYH6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.