Multimerin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404741-ACT

MMRN1 codifica la multimerina-1, una grande glicoproteina multimerica legata da ponti disolfuro, immagazzinata nei granuli α delle piastrine e nei corpi di Weibel–Palade endoteliali e rilasciata in seguito all’attivazione cellulare. La multimerina-1 si localizza nella matrice extracellulare e sulla superficie piastrinica, dove favorisce l’adesione delle piastrine e la stabilizzazione delle risposte emostatiche attraverso interazioni con partner associati alla coagulazione e alla matrice. Questa biologia collega MMRN1 a vie che regolano la degranulazione piastrinica, l’omeostasi vascolare e la formazione del trombo sotto forze di taglio. Alterazioni dell’espressione o della distribuzione di MMRN1 sono state studiate in fenotipi emorragici e trombotici e come marcatore di attivazione piastrinica/endoteliale in contesti di malattie infiammatorie e vascolari.

Multimerin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MMRN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Multimerin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MMRN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MMRN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Multimerin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MMRN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Multimerin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Multimerin-1 nelle cellule tumorali con espressione di MMRN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.